客服中心反馈绍兴某生物技术有限公司想了解自己生产的保健食品液体饮料，需要检测肽含量。

客户背景

客户想把他们自主研发生产的脾氨肽浓缩液(生产日期2023年11月20日)和肝蛋白水解物浓缩液(生产日期2023年11月22日)根据《GB/T22729 海洋鱼低聚肽粉》进行低聚肽含量(以干基计)/%检测，看是否符满足研发目的。

样品名称

脾氨肽浓缩液(生产日期2023年11月20日)

肝蛋白水解物浓缩液(生产日期2023年11月22日)

客户需求

检测样品低聚肽含量(以干基计)/%

解决方案

根据GB/T 22729 海洋鱼低聚肽粉 低聚肽含量

方法和原理：

低分子质量的蛋白质水解物(包括低聚肽及游离氨基酸)可溶于三氯乙酸溶液;高分子质量的蛋白质在三氯乙酸溶液中易沉淀。样品经三氯乙酸溶液溶解后,离心分离出沉淀蛋白质,收集离心清液。按照GB/T 5009.5规定的方法测定离心清液的酸溶蛋白质水解物含量,清液的酸溶蛋白质水解物含量减去游离氨基酸含量得到低聚肽的含量。

酸溶蛋白质水解物含量的测定：称取2g(精确至0.001 g)样品,加入10 mL 15%三氯乙酸溶液,混合均匀,静置10 min。将样品溶液在4 000 r/min下离心10 min后,取全部离心清液,按GB/T 5009.5规定的方法测定清液的蛋白质水解物含量,计算出样品中酸溶蛋白质水解物含量。蛋白质换算系数为6.25.检验结果根据样品的干燥失重,折算为干基。

游离氨基酸含量的测定(高效液相色谱仪测定法)：用三氯乙酸沉淀蛋白质后，以邻苯二甲醛(OPA)和氯甲酸芬甲酯(FMOC一CI)分别作为一级氨基酸和二级氨基酸的衍生反应试剂,采用柱前自动衍生化反相高效液相色谱法测定海洋鱼低聚肽粉中的游离氨基酸总量。

称取样品0.5 g,精确至0.000 1 g,于25 mL容量瓶中,加5%三氯乙酸10 mL沉淀2 h,定容摇匀，过滤,于10 000 r/min离心15 min,取上清液上机,采用外标法进行测定。色谱条件:分析柱:Hypersil AA-ODS,5 um,200 mm×2.1 mm(内径)。流动相:A液:含0.018%三乙胺(TEA)的20 mmol/L乙酸钠缓冲液,用稀乙酸调至pH7.2.加0.3%四氢味喃(THF);B液:20%的 100 mmol/L乙酸钠缓冲液,用稀乙酸调至pH7.2.加40%乙腈和40%甲醇。梯度洗脱程序:0 min时A液为100%,在17 min内B液由o%至60%;18 min时B液为100%,并保持至24 min;25 min时B液回到0%。流速:18.1 min前为0.45 mL/min; 18.5 min升至0.8 mL/min,并保持至23.9 min;24 min降回至0.45 mL/min。紫外检测:测定一级氨基酸用338 nm,二级氨基酸用262 nm(15 min后)。

实验结果：经检测，客户送的脾氨肽浓缩液和肝蛋白水解物浓缩液的低聚肽含量分别为28.1%和20.9%。

客户反馈

客户对于测试结果和我们技术人员进行探讨、我们相互研究并且给客户提供宝贵的意见。并且后续还有好几批样品要送来进行检测。